buchi 目的：建立超高压液相谱法测定马鞭草中齐墩果酸的含量。方法：采用超高压液相谱法（UPLC）测定马鞭草中齐墩果酸的含量，谱柱zorbax RX-SIL（250 mm×4.6 mm，2.5 μm）；流动相：乙腈溶液和0.1%冰醋酸；柱温30 ℃；检测波长210 nm。结果：齐墩果酸在0.006～10.06 mg/ml范围内线性关系良好，平均回收率为99.7%，RSD为1.25%。结论：本法灵敏度高，重复性好，可为马鞭草质量控制提供参考。
标签： 马鞭草； 齐墩果酸； 超高压液相谱法
马鞭草是马鞭草科植物（verbena officinalis L），为传统常用中药[1-2]。有研究显示，马鞭草抗炎、抗早孕及抗人绒毛膜癌作用效果明显[3-4]，其中齐墩果酸是非常重要的活性成分[5-6]。该成分常用检测方法为薄层扫描法[7]、高效液相谱法 [8-9]。本文采用超高压液相谱法（UPLC）测定马鞭草中齐墩果酸的含量，为马鞭草的质量控制提供参考，现将研究结果报道如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器
1290超高压液相谱-紫外检测器，谱柱zorbax RX-SIL（250 mm×4.6 mm，2.5μm；Agilent公司生产；CP225D型电子天平（德国Sartorius公司生产）；旋转蒸发仪（BUCHI公司生产，瑞士）；KS-1500超声提取仪器（宁波科盛仪器厂生产）；超声波清洗器TCQ250（北京医疗设备二厂生产）。
1.2 试药
甲醇为谱纯（上海陆忠试剂厂），乙腈、冰醋酸为HPLC级；水为高纯水（实验室自制）；齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：20110305）。马鞭草购于开封市药材市场，经河南大学天然产物重点实验室鉴定为马鞭草科植物马鞭草verbena officinalis L。干燥阴干，粉碎过40目。
2 方法
2.1 对照品溶液的配制
准确秤取齐墩果酸对照品1.2 mg，放置于10 ml容量瓶中，加甲醇5 ml，超声波助溶，甲醇补全至对应的刻度，0.22 μm滤膜滤过，得标准品溶液，于4 ℃下备存。
2.2 供试品溶液的配置
准确秤取粉碎的马鞭草约1.0 g，置于250 ml三角瓶中，加75%甲醇100 ml，超声辅助提取2 h，过滤，提取3次，提取液合并，浓缩转移至25 ml的量瓶，75%甲醇补充至相应的刻度，得供试品溶液，备用[10]。
3 结果
3.1 谱条件
谱柱：谱柱zorbax RX-SIL（250 mm ×4.6 mm，2.5 μm）；流动相：乙腈溶液（A）和0.1%冰醋酸（B）；流速0.30 ml/min；检测波长210 nm。洗脱程序：0～5 min，A浓度维持15%；3～5 min，A浓度增至30%；5～10 min，A维持30%；10～15 min，A递增至50%；15～20 min，A维持40%；20～25 min，A下降到15%。柱温30 ℃；进样量5 μl。齐墩果酸塔板数理论值>10 000。UPLC谱图见图1。
3.2 线性关系
准确吸取齐墩果酸标准品0.5、1、2、3、4、5 ml于10 ml量瓶中，甲醇稀释并补充至相应的刻度，得浓度分别为0.006、0.012、0.024、0.036、0.048、0.06 mg/ml对照品溶液，5 μl进样[11]，以峰面积积分值（y）为纵坐标，对照品浓度（x）为横坐标进行线性回归，得方程y=27834x+1873，相关系数（R）为0.9998，显示齐墩果酸在0.006～10.06 mg/ml浓度范围内线性关系良好。
3.3 精密度试验
精密吸取对照品溶液1 ml放置于10 ml的量瓶中，甲醇稀释并补充至相应的刻度。5 μl进样测定齐墩果酸的含量，进样连续5次，测定峰面积，齐墩果酸的含量，结果齐墩果酸峰面积RSD值为0.18%，表明该仪器精密度良好。
3.4 稳定性试验
精密吸取供试品溶液5μl依次在0、5、10、15、24 h进样，测定峰面积[12]。计算齐墩果酸的含量，结果齐墩果酸的峰面积RSD值为0.8%，表面在齐墩果酸24 h内测定，含量稳定，完全
可以在24 h完成相关的测定。
3.5 重复性试验
准确吸取5份供试品溶液各5 μl，平行测定.测定峰面积，计算齐墩果酸的含量，结果齐墩果酸的峰面积RSD为0.79%，表明该测定方法重复性良好。
3.6 加样回收率
精密秤定0.5 g已知含量（0.429 mg/g）的马鞭草6份，分别准确加入齐墩果酸对照品0.12、0.17、0.25 mg，参照供试品溶液的制备工艺路线进行提取，5 μl进样测定测定峰面积，计算齐墩果酸的含量，每个样品平行测定3次，计算回收率。结果齐墩果酸平均加样回收率为99.7%，RSD为1.25%。
3.7 样品含量测定
取样品3份，精密秤定，参照供试品溶液的制备工艺路线进行提取，5 μl进样测定测定峰面积，计算齐墩果酸的含量，结果3批样品齐墩果酸的含量分别为0.429、0.433、0.427 mg/g，平均含量0.430 mg/g。
4 讨论
本文建立了超高压液相谱法测定马鞭草药材中齐墩果酸含量的方法，采用乙腈、甲醇等极性较大的有机溶剂作为流动相，能够在较短时间内洗脱，其他成分得到很好的基线分离。试验建立的UPLC方法特异性强、前处理简单、重复性好，与传统的HPLC分离方法比较，分析时间短，操作简便，灵敏度高，精密度及稳定性良好，更加便于对马鞭草药材的质量控制。
参考文献
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