目的 建立肉苁蓉及管花肉苁蓉中半乳糖醇含量的测定方法，为肉苁蓉质量标准的制定提供依据。方法 通过建立半乳糖醇的高效液相谱含量测定方法，对20个批次的肉苁蓉和管花肉苁蓉中半乳糖醇进行分析。谱条件：采用Alltech Pevail Carbohydrate ES谱柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），以乙腈-水（80∶20）为流动相，流速为1.0 mL/min；进样量为10 ?L；蒸发光散射检测器漂流管温度为80 ℃，载气流速为3.0 L/min。结果 半乳糖醇在89.6～1 120 mg/L范围内峰面积对数值与进样量对数值有良好的线性关系（r=0.999 0），方法检出限为15.998 mg/L，定量限为79.903 mg/L，肉苁蓉和管花肉苁蓉中半乳糖醇的平均回收率（n=5）分别为100.34%和101.11%，RSD分别为1.72%和1.33%。结论 该方法简便准确，灵敏度高，重复性好，可以作为肉苁蓉的质量控制方法。
标签：肉苁蓉；管花肉苁蓉；高效液相谱-蒸发光散射检测器；半乳糖醇
肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma或管花肉苁蓉Cistanche tubulosa （Schrenk） R.Wight的干燥带鳞叶的肉质茎[1]，功能补肾阳、益精血、润肠通便，为常用名贵中药，被列入《香港中药材标准》研究计划。肉苁蓉主要活性成分为苯乙醇苷类、环烯醚萜
苷类、木脂素类、寡糖酯类、多元醇以及多糖类化合物等。2010年版《中华人民共和国药典》（一部）在含量测定项下采用高效液相谱法（HPLC）分别对肉苁蓉中2种苯乙醇苷类成分松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量进行了限度检查，但对起润肠通便作用的主要药效成分半乳糖醇没有明确的含量限定[2]。为全面反映药材的质量，《香港中药材标准Ⅳ》收录的肉苁蓉品种增加了半乳糖醇作为含量测定指标。在进行肉苁蓉药材的标准制订工作时，选择了肉苁蓉和管花肉苁蓉2个品种，笔者从不同的药材市场收集样品，并到新疆、内蒙古、甘肃和宁夏等不同产地共采集了2个品种各10批药材，用高效液相谱-蒸发光散射检测器法（HPLC-ELSD）对半乳糖醇含量进行检测，并对方法学进行考察，为肉苁蓉药材的全面质量控制提供依据。
1 仪器与试药
美国Waters 高效液相谱仪（Waters 600 Controller， Waters 717自动进样器，在线脱气机，Waters Empower谱工作站）；SB5200型超声波清洗机（上海Branson公司）；R200D型电子分析天平（德国Sartoriius公司）；R210型旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）。
谱纯乙腈购于德国Merck公司，水由Milli-Q系统制得，其他试剂均为分析纯。半乳糖醇对
照品由北京大学中医药现代化研究中心提供，经HPLC-ELSD检测确定纯度大于98%。
从不同的药材市场收集样品，并到新疆、内蒙古、甘肃和宁夏等不同产地采集肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma和管花肉苁蓉Cistanche tubulosa （Schenk） R.Wight各10批药材（见表1），样品均经赵奎君教授鉴定。标本保存于香港科技大学中药研发中心。
2.2 溶液的制备
取半乳糖醇对照品约5 mg，精密称定，置5 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为1.12 mg/mL的半乳糖醇对照品储备液。
取待测样品粉末（过3号筛）约0.2 g，精密称定，置50 mL离心管中，加50%甲醇12 mL，超声处理60 min（240 W，60 kHz），离心管于3 000×g离心5 min，将上清液转移至25 mL量瓶中，残渣加50%甲醇12 mL，超声处理60 min，离心管于3 000×g离心5 min，上清液合并入前一次提取液中，用50%甲醇定容至25 mL，然后过0.45 ?m滤膜作为供试品溶液。
2.3 线性关系试验
精密吸取“2.2”项下对照品储备液，用50%甲醇稀释制成5个不同浓度（112.0、224.0、448.0、672.0、1 120.0 mg/L）的半乳糖醇对照品溶液，依上述谱条件测定峰面积，峰面积取对数作为为纵坐标，相应浓度取对数为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程：Y=1.673 6X+1.313 8，r2=0.999 8。结果表明，半乳糖醇在89.6～1 120 mg/L范围内峰面积对数值与进样量对数值有良好的线性关系。
2.4 精密度试验
取半乳糖醇对照品溶液（448.0 mg/L），连续进样5次，测得半乳糖醇相对峰面积的RSD=0.2%，表明方法精密度良好。
2.5 重复性试验
取同一批次的肉苁蓉（RCRS-003）和管花肉苁蓉（RCRS-015）样品各5份，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，记录谱图进行分析。样品中半乳糖醇的RSD分别为1.64%、1.15%，表明方法重复性良好。
2.6 加样回收率试验
分别取肉苁蓉（RCRS-003）和管花肉苁蓉（RCRS-015）样品各5份，精密称定肉苁蓉和管花肉苁蓉样品约0.5 g，加入对照品溶液适量。按“2.2”项下方法制备供试品溶液，测定半乳糖醇含量，计算回收率，结果肉苁蓉和管花肉苁蓉中半乳糖醇的平均回收率（n=5）分别为100.34%、101.11%，RSD分别为1.72%、1.33%。
buchi2.7 方法检出限
称取淡竹叶约0.2 g，精密称定，作为空白基质，加入半乳糖醇对照品1.2 mg（半乳糖醇的含量为1 999.75 mg/kg），连续进样7次，测得半乳糖醇峰面积SD=5.095，方法检出限（MDL=3.14SD[3]）为15.998 mg/L。2.8 定量限
称取淡竹叶约0.2 g，精密称定，作为空白基质，加入半乳糖醇对照品2.0 mg（半乳糖醇的含量为10 000 mg/kg），连续进样5次，测得定量限为79.903 mg/L。
2.9 样品含量测定
取不同产地的肉苁蓉和管花肉苁蓉样品，按”2.2”项下方法制备样品溶液，在上述谱条件测定半乳糖醇峰面积，根据其线性回归方程，计算其含量。结果见表3。
在本研究所检测的20批肉苁蓉药材样品中，半乳糖醇的含量均超过3.9%。肉苁蓉和管花肉苁蓉中半乳糖醇的平均含量、最高含量、最低含量见表4。
3 讨论
在选择样品提取条件时，分别加入甲醇、50%甲醇、水及乙酸乙酯，超声处理2次，每次60 min。结果表明，在相同的谱条件，50%甲醇作为提取溶剂时提取率最高。对不同提取方式包括超声提取、索氏提取及加热回流提取进行了考察，结果表明，超声提取效果最优。平行操作的条件下分别考察了超声提取15、30、45、60 min，结果表明，超声提取60 min、提取2次能够将样品中半乳糖醇提取完全。
流动相的选择考察了不同比例（85∶15、80∶20、75∶25、70∶30）的乙腈-水，谱结果显示，乙腈-水比例为80∶20时半乳糖醇的峰面积最大且与其他杂质峰的分离度较好。
半乳糖醇是肉苁蓉润肠通便的主要药效成分，从上述测定结果看，半乳糖醇在肉苁蓉药材中具有较高含量，因此对其进行含量测定是非常必要的，建议在新一版的药典中加入半乳糖醇这个活性成分指标。根据半乳糖醇的含量测定结果，建议肉苁蓉中半乳糖醇含量不低于4.6%，管花肉苁蓉中半乳糖醇含量不低于4.2%。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：126.
[2] 张百舜，陈双厚，赵学文，等.肉苁蓉提取物半乳糖醇通便作用的量效研究[J].中国中医药信息杂志，2003，10（12）：28.
[3] USEPA. Revised assessment of detection and quantitation approaches[M]. Washington DC，2004：2.
发布评论